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大豆制品中尿素酶活性测定方法
2014-08-21 14:30:35 点击量:
来源：中国农业网 时间：2004-12-12 11:27:16
1 适用范围
本标准适用于由大豆制得的产品和副产品中尿素酶活性的测定。本法可确认大豆制品的湿热处理程度。
2 定义
本标准所指尿素酶活性定义如下：
在30±0.5℃和ph7的条件下，每分钟每克大豆制品分解尿素所释放的氨态氮的毫克数。
3 原理
将粉碎的大豆制品与中性尿素缓冲溶液混合，在30℃保持30min，尿素酶催化尿素水解产生氨的反应。用过量盐酸中和所产生的氨，再用氢氧化钠标准溶液回滴。
4 仪器设备
4.1 样品筛：孔径200μm;
4.2 酸度计：精度0.02ph，附有磁力搅拌器和滴定装置;
4.3 恒温水浴：可控温30±0.5℃;
4.4 试管：直径18mm，长150mm，有磨口塞子;
4.5 精密计时器;
4.6 粉碎机：粉碎时应不生强热(例如球磨机)
4.7 分析天平：感量0.1mg;
4.8 移液管：10ml。
5 试剂和溶液
5.1 尿素(gb 696─77)：分析纯;
5.2 磷酸氢二钠(gb 1263─77)：分析纯;
5.3 磷酸二氢钾(gb 1274─77)：分析纯;
5.4 尿素缓冲溶液(ph6.9至7.0)：4.45g磷酸氢二钠(5.2)和3.40g磷酸二氢钾(5.3)溶于水并稀释至1000ml，再将30g尿素(5.1)溶在此缓冲溶液中，可保存1个月。
5.5 盐酸(gb 622─77)：分析纯，c(hcl)=0.1mol/l溶液;
5.6 氢氧化钠(gb 629—77)：分析纯，c(naoh)=0.1mol/l标准溶液，按gb 601标准溶液制备方法的规定配制。
6 试样的制备
用粉碎机(4.6)将10g试样粉碎，使之全部通过样品筛(4.1)。对特殊试样(水分或挥发物含量较高而无法粉碎的产品)应先在实验室温度下进行预干燥，再进行粉碎，当计算结果时应将干燥失重计算在内。
7 测定步骤
称取约0.2g已粉碎的试样，称准至0.1mg，转入试管(4.4)中(如活性很高只称0.05g试样)，移入10ml尿素缓冲溶液(5.4)，立即盖好试管并剧烈摇动，马上置于30 ±0.5℃恒温水浴(4.3)中，准确计时保持30min。即刻移入10ml盐酸溶液(5.5)，迅速冷却到20℃。将试管内容物全部转入烧杯，用5ml水冲洗试管两次，立即用氢氧化钠标准溶液(5.3)滴定至ph4.70。
另取试管作空白试验，移入10ml尿素缓冲液(5.4)， 10ml盐酸溶液(5.5)。称取与上述试样量相当的试样，也称准至0.1mg，迅速加入此试管中。立即盖好试管并剧烈摇动。将试管置于30±0.5℃恒温水浴,同样准确保持30min，冷却至20℃，将试管内容物全部转入烧杯，用5ml水冲洗试管两次，并用氢氧化钠标 准溶液(5.3)滴定至ph4.70。
8 测定结果的计算
8.1 计算方法
以每分钟每克大豆制品释放氮的毫克量表示的尿素酶活性u，按下式计算 ： u=14×c(v0-v)/(30×m)
式中：c── 氢氧化钠标准溶液浓度，mol/l;
v0── 空白试验消耗氢氧化钠溶液体积，ml;
v── 测定试样消耗氢氧化钠溶液的体积，ml;
m── 试样质量，g。
注：若试样经粉碎前的预干燥处理时，则 u=〔14×c(v0-v)/(30×m)〕×(1-s)
式中：s──预干燥时试样失重的百分率。
8.2 重复性
同一分析人员用相同方法，同时或连续两次测定结果之差不超过平均值的10%，以其算术平均值报告结果。
本信息真实性未经中华食品质量网证实，仅供参考。